اثرات استفاده از حلال هایی با خلوص پایین در ستون های کروماتوگرافی
مقدمه
استفاده از حلالهای با خلوص بالا (HPLC گرید) در کروماتوگرافی مایع (HPLC) برای دستیابی به نتایج دقیق و قابل اعتماد ضروری است. حلالهای غیر HPLC گرید حاوی ناخالصیهایی هستند که میتوانند بر عملکرد ستون، کیفیت دادهها و طول عمر سیستم کروماتوگرافی تأثیر منفی بگذارند.
عواقب استفاده از حلالهای غیر HPLC گرید
- تخریب ستون:
- مسدود شدن: ذرات معلق و ناخالصیهای موجود در حلالهای غیر HPLC گرید میتوانند به مرور زمان منافذ ستون را مسدود کنند. این امر منجر به افزایش فشار برگشتی، کاهش کارایی ستون و در نهایت از کار افتادن آن میشود.
- واکنش شیمیایی: برخی از ناخالصیها میتوانند با فاز ساکن ستون واکنش داده و خواص آن را تغییر دهند. این امر منجر به تغییر در زمان بازداری، کاهش گزینشپذیری و ایجاد پیکهای کاذب میشود.
- تخریب شیمیایی: حلالهای غیر HPLC گرید ممکن است حاوی ترکیباتی باشند که باعث تخریب شیمیایی فاز ساکن ستون میشوند. این امر به ویژه در مورد ستونهای فاز معکوس سیلیکاژلی که در pHهای بالا یا پایین ناپایدار هستند، اهمیت دارد.
- تداخل در آنالیز:
- ایجاد پیکهای کاذب: ناخالصیهای موجود در حلال میتوانند در طول آنالیز پیکهای مزاحم ایجاد کنند که شناسایی و کمیسازی ترکیبات مورد نظر را دشوار میسازد.
- افزایش نویز: ناخالصیها میتوانند باعث افزایش نویز پسزمینه شوند و حساسیت روش را کاهش دهند.
- تغییر در زمان بازداری: ناخالصیها میتوانند بر برهمکنشهای بین آنالیتها و فاز ساکن تأثیر گذاشته و زمان بازداری آنها را تغییر دهند. این امر میتواند منجر به اشتباه در شناسایی ترکیبات شود.
- آسیب به سیستم کروماتوگرافی:
- خرابی پمپ: ذرات معلق و ناخالصیها میتوانند به قطعات پمپ آسیب برسانند و باعث کاهش دقت و طول عمر آن شوند.
- آلودگی دتکتور: ناخالصیها میتوانند سلول دتکتور را آلوده کرده و باعث کاهش حساسیت و دقت آن شوند.
- مسدود شدن لولهها و اتصالات: ذرات معلق میتوانند لولهها و اتصالات سیستم را مسدود کرده و باعث ایجاد مشکل در جریان حلال شوند.
تأثیر بر انواع مختلف ستونهای کروماتوگرافی
- ستونهای فاز معکوس (Reversed-Phase): این ستونها به دلیل استفاده گسترده و حساسیت بالا نسبت به ناخالصیها، بیشتر در معرض آسیب قرار دارند.
- ستونهای فاز نرمال (Normal-Phase): این ستونها نسبت به ستونهای فاز معکوس کمتر حساس هستند، اما باز هم میتوانند تحت تأثیر ناخالصیهای موجود در حلال قرار گیرند.
- ستونهای تبادل یونی (Ion-Exchange): این ستونها به pH و نوع حلال بسیار حساس هستند و استفاده از حلالهای نامناسب میتواند منجر به تخریب آنها شود.
- ستونهای اندازه طردی (Size-Exclusion): این ستونها به دلیل داشتن منافذ بسیار ریز، به شدت در معرض مسدود شدن توسط ذرات معلق هستند.
راهکارهای کاهش اثرات منفی
- استفاده از پیش ستون (Guard Column): پیش ستونها قبل از ستون اصلی قرار میگیرند و ناخالصیها و ذرات معلق را جذب میکنند.
- فیلتراسیون حلال: قبل از استفاده، حلالها را با استفاده از فیلترهای غشایی با اندازه منافذ مناسب فیلتر کنید.
- نگهداری و شستشوی منظم ستون: ستونها را به طور منظم با حلالهای مناسب شستشو دهید تا ناخالصیها و ذرات معلق از آنها خارج شوند.
- انتخاب حلال مناسب: حلالهایی را انتخاب کنید که با فاز ساکن ستون سازگار باشند و کمترین میزان ناخالصی را داشته باشند.
نتیجهگیری
استفاده از حلالهای غیر HPLC گرید در ستونهای کروماتوگرافی میتواند عواقب جدی برای عملکرد ستون، کیفیت دادهها و طول عمر سیستم کروماتوگرافی داشته باشد. برای دستیابی به نتایج دقیق و قابل اعتماد، همواره از حلالهای با خلوص بالا (HPLC گرید) استفاده کنید و راهکارهای کاهش اثرات منفی را رعایت کنید.
